Как определить концентрацию гемоглобина методом сали

Определение концентрации гемоглобина – метод Сали

Важнейшие из методов определения концентрации гемоглобина — колориметрические. Они широко применяются на пра­тике ввиду их простоты и доступности. Среди данных методов наиболее распространен метод Сали .

Принцип определения гемоглобина по методу Сали

Определение уровня гемоглобина крови по гематиновому методу Сали основан на превращении гемоглобина при прибавлении к крови хлористоводородной кислоты в хлоргемин коричневого цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию гемоглобина. Полученный раствор хлорида гематита разводят водой до цвета стандарта, соответствующего известной концентрации гемоглобина.

Гемометр Сали

Определение уровня гемоглобина проводят в упрощенном колориметре — гемометре Сали . Этот прибор состоит из пластмассового штатива с 3 вертикальными гнездами. В боковых гнездах находятся 2 запаянные пробирки со стандартной жидкостью.

В среднее гнездо гемометра вставляют открытую сверху градуированную стеклянную пробирку того же диаметра, что и цветные стандарты. Градуированная пробирка имеет шкалу с делениями, показывающую количество гемоглобина в граммах на 100 миллилитров крови, то есть грамм-процентах (г%).

При геометре имеются специальная пи­петка для воды и стеклянная палочка для перемешивания.

Методика определения гемоглобина по методу Сали

В градуированную пробирку наливают до деления, помеченного цифрой «2 грамм-процента» (нижняя круговая метка) 0,1 грамм-процента раствора хлористоводородной кислоты. Затем набирают кровь в капиллярную пипетку до метки «0,02 миллилитра», всасывая е ртом через резиновую трубку. Обтерев кончик пипетки снаружи ватой, опускают ее в пробирку с 0,1 грамм-процента раствором хлористоводородной кислоты и осторожно выдувают кровь.

Повторными всасываниями и выдуваниями верхнего слоя жидкости пипетку ополаскивают. Пробирку несколько раз встряхивают и, заметив время, ставят в штатив. Для полного превращения гемоглобина в хлорид гематита требуется не менее 5 минут. Через 5 минут геометр поднимают до уровня глаз и сравнивают цвет испытуемой жидкости с цветом стандартов. Обычно, за исключением случаев крайне тяжелой анемии, он темнее, чем в стандартных пробирках.

С помощью неградуированной пипетки к испытуемому раствору добавляют по каплям дистиллированную воду, перемешивают стеклянной палочкой и сравнивают со стандартами. Как только цвет исследуемой жидкости станет одинаков с цветом стандартов, отмечают, какому делению шкалы соответ­ствует уровень жидкости (по нижнему мениску) в пробирке.

Промышленность выпускает гемометры, содержащие грамм-процентную шкалу. За идеальную норму принимают концентрацию гемоглобина в крови, равную 16,67 грамм-процента, или 166,7 грамма/литр.

При соблюдении всех правил работы с гемометром у одного и то­го же больного при определении гемоглобина в разных порциях крови получают расхождение результатов в пределах ±0,3 грамм-процента (3 грамма/литр).

Метод Сали для определения количества гемоглобина прост и доступен в использовании, но субьективность оценки и длительность времени измерения усложняют его выполнение.

В норме уровень гемоглобина у женщин составляет 120-140 г/л, у мужчин количество гемоглобина больше и составляет 130-150 г/л.

Лабораторная работа № 3.10. Определение количества гемоглобина

. Содержание гемоглобина в норме приведено в таблице 16.

Таблица 16 —Содержание гемоглобина в норме

Показатели Пол Система Среднее значение
г% г/л Ед. г% г/л
Гемоглобин (Hb) М 13,0 –16,0 130,0 -160,0 80-108 15,8
Ж 12,0 –15,0 120,0 -150,0 70-95 13,7

А). Гематиновый метод (метод Сали).

Цель работы: освоить калориметрический способ определения гемоглобина с помощью гемометра Сали.

Основан на превращении гемоглобина при добавлении к крови хлористоводородной кислоты в хлорид гематина коричневого цвета. В учебных целях используют гемометр Сали, состоящий из трех пробирок одинакового диаметра (рис.18). Одна (средняя) пробирка – пустая и сверху открыта, две другие запаянные и содержат стандартный раствор солянокислого гематина определенной окраски.

Оборудование:гемометр Сали, 0,1 % раствор НСl, смеситель, стерильный скарификатор, пипетка, дистиллированная вода, стеклянная палочка, спирт, вата.

Рис. 18 Гемометр Сали

1 — пробирки со стандартным раствором;

2 — градуированная пробирка с исследуемой кровью;

5 — палочка для смешивания.

ХОД РАБОТЫ

1.В градуированную пробирку гемометра Сали налить 0,1 % раствор соляной кислоты до нижней круговой метки – 0,2 мл.

2.Приготовить смеситель к забору крови (на тупой конец надеть резину, промыть водой и продуть).

3.Ватным тампоном протереть мякоть 4-го пальца левой руки и скарификатором проколоть палец

4.Первую каплю крови стереть сухим тампоном. Во вторую каплю погрузить кончик смесителя, держа его вертикально. Набрать крови до метки 0,2 мл.

5.Смеситель погрузить в градуированную пробирку гемометра и выдуть из нее кровь на дно пробирки.

6.Смеситель промыть 2-3 раза 0,1% раствором соляной кислоты из верхнего прозрачного слоя.

7.Содержимое пробирки тщательно перемешать, ударяя пальцем по ее концу и помешивать палочкой, а потом оставить на 5 минут.

Читать еще:  Причины повышенного пульса при нормальном давлении

8.В пробирку с раствором, размешивая палочкой, по каплям внести дистиллированную воду до полного совпадения цвета жидкости в градуированной пробирке с цветом стандарта.

9.Показания гемометра снять по нижнему мениску жидкости в градуированной пробирке.

Градуированная пробирка гемометра имеет две шкалы, нанесенные с обеих сторон. Одна шкала (с делениями от 2 до 23) показывает количество гемоглобина в граммах на 100 мл крови, грамм-процент (г%) гемоглобина. Вторая шкала (с делениями от 12 до 140) показывает единицы гемометра (или относительный процент гемоглобина), при этом 100 единиц (или 100% по гемометру Сали) означают, что в 100 мл крови содержится 16,67 г гемоглобина, или 100 единиц соответствует 16,67 г%.

10. Вычисление концентрации гемоглобина по формулам в г%, % и г/л

Пример 1. Равенство красок достигнуто на отметке 15 г% гемоглобина. Для расчета концентрации Hb в относительных процентах применяется формула:

Формула для расчета: Х = (100 % х 15 г%)/16,7 г%,

где Х – относительное содержание гемоглобина, %.

16,7 – стандартная концентрация Hb в г%.

Пример 2. Равенство красок достигнуто на отметке 80. Следовательно, исследуемая кровь содержит 80 % гемоглобина по сравнению со стандартом (16,7 г%)

Формула для расчета: Х = (16,7 г% х 80 %)/100 %,

где Х – количество гемоглобина в г%

Для того чтобы выразить концентрацию гемоглобина в граммах на литр (г/л), нужно количество гемоглобина в г% умножить на 10.

Пример 3. Гемоглобин – 13,5г% = 13,5 х 10 = 135 г/л.

Грамм процентное обозначение гемоглобина имеет преимущества перед обозначением просто в единицах, так как оно дает реальную количественную величину концентрации гемоглобина.

Оформление протокола

1. Определите концентрацию гемоглобина.

2. Занесите данные в таблицу 17

Таблица 17. —Собственные результаты исследований

Пол Содержание гемоглобина в крови
Полученные результаты Норма
В грамм процентах (г%)
Мужчины 13,0 –16,0
Женщины 12,0 –15,0
В грамм на литр г/л
Мужчины 130,0 -160,0
Женщины 120,0 -150,0
В относительных процентах
Мужчины
Женщины
  1. Сделайте заключение о соответствии полученных вами данных нормативным.

Б).Гемоглобинцианидный метод(сиспользованием фотометрического гемоглобинометра АГФ – 03/540 – «Минигем».

Оборудование:гемоглобинометр АГФ – 03/540 – «Минигем», трансформирующий раствор,стерильный скарификатор, гемоглобиновый капилляр (0.02 мл), пипетка с грушей (5мл), дистиллированная вода, стеклянная палочка, спирт, вата.

1.Проверить оптический ноль прибора (в соответствии с техническим паспортом прибора).

2.Подготовить пробирки с трансформирующим раствором в объеме -5 мл.

3. Произвести забор капиллярной крови в гемоглобиновый капилляр и перенести в пробирки с трансформирующим раствором.

4. Тщательно перемешать стеклянной палочкой.

5.Через 20 мин. провести замер пробы, для чего перелить в оптическую кювету реакционную смесь из очередной пробирки и установить кювету в фотометрическую ячейку прибора.

6.Появление звукового сигнала свидетельствует о фотометрировании и на индикаторе появляется число, соответствующее концентрации гемоглобина (в гр./л).

7. Вылить содержимое кюветы, удалить оставшиеся капли с верхнего края кюветы при помощи бинта и перейти к очередному замеру.

Контрольные вопросы для самостоятельного изучения:

1.Строение молекулы гемоглобина

2.Строение молекулы миоглобина.

3.Соединения гемоглобина с различными газами и их значение.

6.Как определить содержание гемоглобина в крови.

7.Типы гемоглобина у эмбриона, плода, новорожденного и детей раннего возраста.

Поперечные профили набережных и береговой полосы: На городских территориях берегоукрепление проектируют с учетом технических и экономических требований, но особое значение придают эстетическим.

Опора деревянной одностоечной и способы укрепление угловых опор: Опоры ВЛ — конструкции, предназначен­ные для поддерживания проводов на необходимой высоте над землей, водой.

Папиллярные узоры пальцев рук — маркер спортивных способностей: дерматоглифические признаки формируются на 3-5 месяце беременности, не изменяются в течение жизни.

Определение содержания гемоглобина методом Сали

Содержание гемоглобинакрови в нормеу взрослых: у мужчин 130-160 г/л; у женщин 120-140 г/л. Суточные вариации содержания гемоглобина в периферической крови достигают 15% с максимумом по утрам. У жителей северных регионов и высокогорных районов уровень гемоглобина нередко оказывается выше приведенных значений на 10 г/л. У пожилых людей (старше 65 лет) нижняя граница нормы показателя достигает 122 г/л у мужчин и 110 г/л у женщин.Гемометр Сали представляет собой штатив и состоит из 3 пробирок одинакового диаметра. Одна (средняя) пробирка — пустая, две другие запаяны и содержат стандартный раствор солянокислого гематина определенной окраски. Интенсивность окраски стандарта соответствует идеальной норме — содержанию гемоглобина 166,7 г/л (16,67 г%).

ЦЕЛЬ: освоить определение содержания гемоглобина по методу Сали.

ОСНАЩЕНИЕ:гемометр Сали; 0,1Н раствор хлористоводородной кислоты; дистиллированная вода, капилляр (0,02 мл) стеклянная палочка.

Читать еще:  Как убрать сосуд на лице в домашних условиях?
ХОД РАБОТЫ: В свободную градуированную пробирку до нижней кольцевой метки налейте 0,1 Н раствор хлористоводородной кислоты. Специальным капилляром наберите 0,02 мл крови и осторожно выпускайте в пробирку под слой кислоты так, чтобы верхний слой остался неокрашенным. Содержимое пробирки перемешайте и оставьте на 5-10 минут: это время для образования солянокислого гематина коричневого цвета. Затем полученный раствор хлорида гематина темно-коричневого цвета разведите водой до цвета стандарта: по каплям добавляйте дистилированную воду, каждый раз перемешивая стеклянной палочкой. Как только цвет исследуемой жидкости полностью сравняется с цветом стандартов в гемометре Сали, отметьте, какому делению шкалы градуированной контрольной пробирки соответствует нижний мениск жидкости: это и будет искомое количество гемоглобина. Пробирка градуирована в г%, поэтому для перевода значения в г/л полученную цифру нужно умножить на 10. Гемометр Сали. 1 – запаянные пробирки со стандартной жидкостью; 2 – градуированная пробирка; 3 – капилляр с меткой 0,02 мл.

Определите концентрацию гемоглобина в образце крови, предлагаемой для исследования;

сделайте заключение о соответствии полученных вами данных нормативам.

3. Расчёт цветового показателя.

Цветовым показателем (ЦП)называютусловную величину, характеризующую степень насыщения гемоглобином каждого эритроцита. Этот показатель можно вычислить, зная содержание гемоглобина в исследуемой крови и количество эритроцитов в 1 мкл этой же крови.

ЦП = Нв (г/л) * 3 / (три первых цифры от числа эритроцитов)

В норме цветовой показатель равен 0,85 — 1,15 — нормохромазия.

Превышение ЦП верхнего предела нормы называют гиперхромазией, уменьшение за предел нижнего уровня нормы — гипохромазией.

ХОД РАБОТЫ:определив в исследуемой крови содержание гемоглобина и эритроцитов в 1 л крови, рассчитайте цветовой показатель, сопоставьте с показателями нормы.

4. Подсчёт лейкоцитов в камере Горяева.

Камера Горяева должна быть сухой и чистой. К ней притирают покровное стекло до появления радужных полос. В смеситель (меланжер) для лейкоцитов (белая палочка в шарообразном расширении) до нижней метки «0,5» набирают кровь, а затем до метки «11» за шарообразным расширением 5% раствор уксусной кислоты, которая разрушает оболочки лейкоцитов (в камере подсчитывают их ядра), а кровь в меланжере разводится в 20 раз. Лейкоциты считаютв 100 больших квадратахсогласно правилу Егорова.Подсчёт производят по формуле:

Л=В*250*20*10^ 6 /100

где Л — количество лейкоцитов в 1 л крови; В — сумма лейкоцитов в 100 больших квадратов; 250 — множитель, приводящий к объёму крови 1 мкл (объём большого квадрата 1/250 мкл); 20 — разведение крови (кровь в меланжере разводится в 20 раз); 100 — число больших квадратов; 10^ 6 — количество мкл в одном литре.

В норме количество лейкоцитов 4-5 10 9 /л. Факторы, влияющие на количество лейкоцитов: возраст; время суток (нормальные биоритмы); приём пищи.

Дата добавления: 2016-11-03 ; просмотров: 1846 | Нарушение авторских прав

Как определить концентрацию гемоглобина методом сали

Количество гемоглобина можно определить или спектроскопически, посредством определения количества железа, или путем измерения красящей способности крови (колориметрически).

Для клинических целей используется последний метод, который требует небольшого количества крови и дает возможность быстро определить количество гемоглобина. Наиболее распространенным является метод Говерса в видоизменении Сали.

Определение гемоглобина по Сали основано на том, что гемоглобин крови в растворе соляной кислоты переходит в солянокислый гематин, который и сравнивается с гематином определенной концентрации, взятом в качестве стандарта. Процент гемоглобина в этом случае определяется колориметрически.

Набор Сали состоит из запаянной стандартной пробирки, наполненной раствором солянокислого гематина. Ввиду того, что стандартная жидкость довольно быстро выцветает, в последнее время выпущены стандарты из цветного стекла, окрашенные под цвет солянокислого гематина металлическими окислами. Эти стандарты не выцветают даже под действием прямого солнечного света.

Между стандартными пробирками помещается пробирка, имеющая деления от 10 до 140 или от 10 до 170 такого же диаметра, как и первая. Пробирка с делением от 10 до 140 предназначена для определения гемоглобина в единицах Сали, а от 10 до 170—в процентах.

Подставка, в которой помещаются стандартные и градуированные пробирки, представляет собою деревянную колодку с вырезанными продольными отверстиями и углублениями для них. Сзади колодки прикреплено матовое стекло, которое дает рассеянный свет; на его фоне резко оттеняется окраска стандарта и испытуемой сыворотки.

Для взятия крови прилагается капиллярная пипетка с меткой 20 мм, которая определяет количество крови, взятой для исследования.

Кроме гемоглобинометра, для определения гемоглобина необходимо иметь N/10 раствор НС1 и дистиллированную воду.

Техника определения следующая. В градуированную пробирку до метки 20 набирается N/10 раствор НС1, затем в капилляр до метки 20 мм3 насасывается кровь и, осторожно очистив конец капилляра, переносят ее в пробирку

Читать еще:  Как чай с бергамотом влияет на артериальное давление

Рис. Гемоглобинометр Сали.

С соляной кислотой. Кровь осторожно выдувают в А710 раствор соляной кислоты, содержимое пробирки из верхнего прозрачного слоя набирается в капилляр и снова выдувается в пробирку.

Капилляр промывается 2 или 3 раза и осторожно удаляется из пробирки. Кровь гемолизируется, и при распаде образуется солянокислый гематин. Жидкость постепенно становится коричневой. Спустя 5—7 минут после выдувания крови, в пробирку начинают прибавлять дистиллированную воду. Вначале прибавляют по нескольку капель, а затем, по мере изменения цвета и приближения его к стандарту,—то одной капле. Кровь смешивается или стеклянной палочкой с утолщением на конце или же покачиванием прсбирочки. Необходимо следить за тем, чтобы жидкость при смешивании не терялась.

Уровень жидкости после разведения указывает на количество гемоглобина. Учет ведется по нижнему мениску жидкости. Допустимой ошибкой при вторичном исследовании той же самой крови считается расхождение в пределах пяти делений. Метка 80 на пробирке с делением до 140 и цифра 100 на пробирке с делением до 170 соответствует 16,0—17,0 гемоглобина в 100 мл крови. Чтобы получить абсолютную цифру, показывающую количество гемоглобина в граммах в 100 мл крови, необходимо показания гемометра в процентах Сали умножить на 0,17, а количество в единицах— на коэффициент 0,2125.

Вид животного

Средний показатель в % Сали

Колебания

В 100 мл крови в г

Фамилия автора

Крупный рогатый скот.

80—110

C. Хрусталев
С. Смирнов
Ф. Михайлов
Баранов

C. Веремейчик

Количество гемоглобина у здоровых животных колеблется в следующие пределах (см. табл. на стр. 418).

Колебания гемоглобина зависят от возраста, пола, породы, характера кормления и некоторых других условий. При патологических процессах количество гемоглобина может быть увеличено и уменьшено по сравнению с нормальными показателями.

Увеличение количества гемоглобина носит название плейохромии. Она может возникнуть вследствие сгущения крови при потере жидкости организмом (понос, рвота, потливость), при образовании экссудатов и транссудатов, Плейохромию отмечают при кровепятнистой болезни лошадей, интоксикациях и отравлениях. Повышение количества гемоглобина отмечается при физическом напряжении лошади. При хорошей подготовке (тренировка) количество гемоглобина остается почти без изменений.

Уменьшение гемоглобина (олигохромемия) встречается довольно часто и особенно при заболеваниях, связанных с анемией. Олигохромемия является симптомом острых и хронических заболеваний, различных по своему происхождению.

Олигохромемия связана с уменьшением общего количества эритроцитов или обеднением эритроцитов гемоглобином. Следовательно, олигохромемия определяет не только степень, но и характер анемии. Необходимо, однако, учесть, что правильная оценка может быть сделана только при условии подсчета эритроцитов и определения величины цветного показателя.

Определение цветного показателя. Цветной показатель дает представление об отношении гемоглобина к красным кровяным тельцам. Метод определения цветного показателя основан на сравнении. Если в норме цветной показатель равен примерно единице, то изменение этой цифры в сторону увеличения или уменьшения рассматривается, как весьма важный показатель нарушения соотношения между эритроцитами и гемоглобином.

У животных определение цветного показателя проводится по формуле:

Гемоглобин 2 Эритроциты 2 Гемоглобин 2 х эритроциты 1

Гемоглобин 1 / эритроциты 1 = гемоглобин 1 x эритроциты 2

Где гемоглобин 1 и эритроциты 1 показывают среднее количество гемоглобина и эритроцитов у здорового животного и гемоглобин 2 и эритроциты 2—найденное количество гемоглобина и эритроцитов у исследуемых животных. Если у лошади взять за норму количество гемоглобина 75, а эритроцитов 7 500 000, то цветной показатель будет равен единице. Всякое отклонение в количестве гемоглобина и эритроцитов поведет к изменению цветного показателя. Необходимо учитывать только такие отклонения от нормы, которые превышают 15%. Небольшие отклонения учитывать не следует.

Определение цветного показателя имеет значение в дифференциации анемий. При постгеморрагических анемиях, когда имеется одновременно уменьшение как количества эритроцитов, так и гемоглобина, цветной показатель приближается к единице; ниже единицы цветной показатель бывает при вторичных анемиях, при которых снижается количество гемоглобина, при почти нормальном или слегка сниженном количестве эритроцитов; выше единицы цветной показатель отмечается при гемолитических анемиях, когда в ток крови выбрасывается значительное количество молодых клеток (повышенная регенерация).

Для суждения о средней насыщенности эритроцитов гемоглобином практически можно использовать определение кровяного числа. Оно получается делением найденного количества гемоглобина на число эритроцитов в миллионах, например:

75% / 7(000000) = 11 или 90% / 10(000000) =9

Величина кровяного числа неодинакова у различных животных и зависит от количества эритроцитов и гемоглобина в норме, но в среднем она приближается к 10.

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector