Значение резус-фактора крови методики его определения

Как определить резус фактор крови

Резус-фактор крови человека показывает наличие или отсутствие на поверхности эритроцитов специфического протеина Rh. Если Rh присутствует, то кровь называют резус-позитивной Rh+, если отсутствует, то Rh-. Белковая молекула Rh присутствует на мембране эритроцитов 85% землян. Определение резус фактора крови проводят для предотвращения возможной несовместимости при процедуре переливания крови.

Влияние резус-фактора на состояние здоровья людей не установлено. Признак передаётся по наследству и не меняется всю жизнь.

Когда необходим анализ

Информация о присутствии или отсутствии Rh factor необходима, если предстоит гемотрансфузия или хирургическая операция, или женщина забеременела. Анализ выявления резус-фактора проводится во время определения группы крови.

Если происходит трансфузия резус-позитивной донорской крови резус-негативному реципиенту, возникает резус-столкновение. Иммунная система организма реципиента начинает продуцировать антитела к резус-положительным эритроцитам, они разрушаются. Такое явление получило название «гемолиз». Поэтому, при гемотрансфузии необходимо, чтобы кровь отдающего и принимающего совпадала по группе и по резусу.

Особую опасность представляет резус-конфликт крови во время беременности резус-негативных матерей. Если у резус–негативной матери формируется резус-позитивный плод, иммунная система вырабатывает антитела в крови к эритроцитам эмбриона и разрушает их. Плод, в таком случае, погибает. Риск такого развития событий наиболее вероятен при второй и последующих беременностях. Разработаны методы предохранения от резус-конфликта Rh- матери и Rh+плода, позволяющие сохранить жизнь и здоровье будущего ребёнка.

При беременности очень важно знать резус фактор крови

Определение Rh крови происходит во время забора крови из пальца или вены для стандартного анализа крови.

Методы определения

Сущность всех методов определения резус-фактора заключается в прохождении реакции склеивания (агглютинации) эритроцитов.

Различают четыре метода определения резус-фактора:

Метод конглютинации

Для проведения анализа конглютинативным методом используют сосуды Петри, пипетки одноразовые, физраствор, стандартные serum ко всем группам крови.

Проведение анализа заключается в следующих действиях лаборанта:

  • Наносят на поверхность чашки Петри три ряда(серии) капель реагента, по две в каждом;
  • В каждую серию добавляют каплю испытуемой крови и по капельке контрольных позитивных и контрольных негативных эритроцитов;
  • Смешивают и выдерживают на водяной бане при 47°C десять минут;
  • Определяют результат. Позитивным считают выпадение хлопьев, а негативным их отсутствие.

Метод цоликлонов

Фактор резус обнаруживают при помощи моноклональных антител. Это иммуноглобулины в крови, которые продуцируются клетками, произошедшими от одной предшественницы, то есть моноклоном. Реагенты, выделенные из таких клеток, получили название цоликлоны.

Ампулы с цоликлонами

Определение резус-фактора крови цоликлонами проводят в натуральной крови. Используют метод прямого скучивания на планшете. В лунку пластины вносят одну крупную каплю цоликлона, рядом помещают каплю крови небольшого размера. Кровь смешивают с реагентом при покачивании планшета. Первые признаки склеивания эритроцитов появляются, спустя 15 секунд, но результат определяют через три минуты. Позитивным для резуса считают появление крупиц свернувшейся крови. Все исследования проводят в лаборатории при температуре 15-25°С и хорошей освещённости.

Ускоренный метод

Используют универсальную serum антирезус. Определение резус фактора крови методика ускоренная включает:

  • Внесение в пробирку капли крови и двух капель препарата «антирезус»;
  • Перемешивают содержимое пробирки поворачиванием без встряхивания. Содержимое равномерно распространяется по стенке пробирки;
  • Добавление в пробирку физраствора в количестве около 3 мл и перемешивание содержимого при неоднократном переворачивании посуды;
  • Наблюдение хлопьеобразования. Там, где они формируются, кровь Rh+.
  • Этот метод быстрый, но не точный. Псевдопозитивная реакция с Rh- эритроцитами проявляется в случае нахождения на поверхности эритроцитов антигенов в крови, отношения к Rh не имеющих. Параллельно проводят ещё один тест с контрольной эссенцией усилителя. Если и в этом случае образуются хлопья, результат признают недостоверным и тестирование крови повторяют с новым реагентом.

Желатиновый метод

Широко используют желатиновый ускоренный метод определения Rh. Он состоит в добавке к крови одной капли 10 % эссенции желатина, десятиминутной выдержки пробирок в термостате при +37, с последующим добавлением подогретого изотонического р-ра NaCl. Желатин препятствует образованию неспецифической агглютинации.

Резус фактор родителей

Комбинация хромосом, влияет и на пол будущего ребёнка и на его резус-фактор. Существует вероятность определения группы крови по родителям. Если мать и отец лишены резусного антигена, то и их дети, будут иметь Rh-. Резус-позитивные гены обладают доминантностью, то есть, преимуществом пред резус- негативными.

Если у одного родителя Rh+, а у другого Rh-, шанс на получение ребёнком Rh+ составляет 75%, а на рождение с Rh- , соответственно, 25%. Если у обоих родителей Rh+, то в пятнадцати случаях из шестнадцати, у их чад тоже будут Rh+. И, только в одном случае из шестнадцати, существует вероятность появления на свет младенца с Rh-.

Сведения о резус-факторе необходимы, если есть показания для переливания крови. Гемотрансфузия возможна только при использовании совместимой по резусу, и группе. Определение Rh-factor у беременных является залогом предупреждения рисков для формирующегося плода. Лучше всего знать свой Rh на этапе планирования беременности, чтобы исключить резус-столкновение между Rh-матерью и Rh+плодом.

Читать еще:  Перикардит – симптомы, виды, причины и лечение перикардита —

Методики определения групп крови, описание таблицы

Практически каждый человек хотя бы единожды за свою жизнь проходил тест для установления принадлежности группы крови. О методах проведения данного анализа и об их достоверности пойдет речь далее.

Для чего проводится диагностика?

Группа крови – это определенный ряд антигенов, размещенных на поверхности эритроцитов, которые и определяют их специфичность. Таких антигенов известно очень много, поэтому принято единую классификацию крови по АВО и резус-фактору.

Этот показатель в обязательном порядке определяется у пациентов перед хирургической операцией, военным, полицейским и другим категориям людей, которые могут потребовать срочного переливания крови.

Стандартная методика определения группы крови

Самый распространенный метод исследования данного показателя – это способ с применением стандартной сыворотки. Эта диагностика определяет общепринятые антигены по системе АВО.

Изогеммагглютинирующая сыворотка представляет собой совокупность специальных антител к наружным частичкам эритроцитов. Если находится совместимый антиген, на который могут воздействовать антитела, то формируется комплекс, способствующий началу иммунно-защитного механизма. Вследствие этого происходит склеивание эритроцитарных клеток крови (агглютинация). Если подобное происходит, то делается вывод о несовместимости крови.

Данные сыворотки изготавливаются из крови доноров по специальной системе, подразумевающая под собой извлечение плазмы, в которой и содержать антитела, после чего ее разводят изотоником – хлорид натрия, это проходит в несколько этапов:

  • В емкость наливают 1 мл воды, в которой растворено 0,9% обычной соли.
  • В эту же пробирку вносят такое же количество разведенной плазмы.
  • Затем 1 мл данной жидкости вносят в емкость с изотоником.

Процесс позволяет получить соотношение 1:256. Если методика разведения будет нарушена, то есть большая вероятность получения ошибочных результатов.

Проведение исследования

На поверхность планшета наносится 0,1 мл каждой сыворотки в район, где нанесена нужная пометка. За тем берется исследуемая кровь объемом 0,01 мл для каждого образца. И затем проводится смешивание каждой капли сыворотки с кровью.

Спустя пять минут проводят диагностику. Тестирование считается положительным, если прошла реакция агглютинации. Исходя из результатов анализов, выполняется построение таблицы, в которую они и заносятся.

Таблица результатов теста на группу крови с применением стандартных сывороток.

Методика перекрестных реакций

В этом случае, чтобы определить агглютиноген используют цоликлоны. Иначе стандартные сыворотки с технологией параллельного выяснения благодаря эталонным эритроцитарным клеткам.

Два этих способа весьма сходны между собой. Но различия все, же есть.

На поверхность, на которую предварительно помещаются различные сыворотки, наносят по небольшой капле обычных эритроцитов. Затем кровь разделяют на фракции при помощи центрифуги. И форменные элементы добавляют к стандартным сывороткам, а плазменную часть – к стандартным эритроцитарным клеткам. Оценивание результатов проводят через пять минут и показатели отмечают в таблице.

Благодаря данной методике исключаются ошибки при исследовании.

Метод с использованием цоликлонов

Если нет возможности определить группу крови стандартными сыворотками, то используют данную методику.

Цоликлоны – гибридные антитела, которые получают из в-лимфоцитов крови мышей.

Последовательность проведения диагностики такая:

  1. После нанесения отметок на планшет, которые соответствуют виду цоликлона, наносится раствор.
  2. К каждому образцу цоликлона вносят одну каплю диагностированной крови.
  3. Оценка результатов через пять минут.
  4. Для данной методики необходимо соблюдать специальные условия. Они включают в себя пригодность цоликлонов, температуру в помещении и уровень влажности.

Результаты анализов считаются позитивными в том случае, когда при смешивании данных фракций наблюдается реакция агглютинации. Если подобное произошло в двух образцах, то считается, что кровь относится к четвертой группе. Если реакция не наблюдается вовсе, то к первой. Диагностические ошибки в данной методике встречаются не часто.

Быстрый способ «Эритротест»

Выше перечисленные способы используются в медицине уже долгое время и распространены по всему миру. Но ввиду того, что отрасль постоянно развивается, вводятся быстрые диагностические методы по установлению принадлежности к группе крови. Таким нововведением считается и «Эритротест».

Чтобы определить показатель данным способом необходимо иметь следующее оборудование:

  • Стандартный планшет с пятью лунками
  • Скарификатор для прокола и получения биологической жидкости
  • Стеклянная пипетка с резиновой грушей
  • Пипетка для забора реактивов
  • Палочки для смешивания компонентов

Основное преимущество эритротеста состоит в том, что исследование не требует дополнительных условий и доступно в тот момент, когда проведение стандартной диагностики невозможно.
Последовательность проведения
В углублениях планшета размещают цоликлоны к антигенам поверхностного типа и основному, который отвечает за наследственную передачу резус-фактора. В последнюю лунку добавляют контрольную сыворотку, которая исключит ошибочный результат и верно укажет на принадлежность к той или иной группе.

Читать еще:  Таблетки разжижающие кровь список

Оценивание результатов анализа проводится с помощью таблицы, в ней указываются возможные результаты тестирования.

Классификация по системе АВО

Группа крови, определение ее проводится исходя из специально разработанных норм. Существует определенная таблица, которая характеризует каждую группу крови.

Группы Описание
I (0) Эритроцитарные антигенные качества не наблюдаются
II (А) Присутствие антигена А
III (В) Наличие на поверхности эритроцитарных клеток антигена В
IV (АВ) Присутствие обоих антигенов

Видео: Методы определения групп крови:

MED24INfO

Петров Сергей Викторович, Общая хирургия , 1999

СПОСОБЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗУС-ФАКТОРА

Все методы определения резус-фактора делятся на способы, применяемые в клинике: в условиях приемного покоя, в операционной, на отделении у постели больного и т. д., не требующие специального лабораторного оснащения, и лабораторные способы.

  1. СПОСОБЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ RH-ФАКТОРА В КЛИНИКЕ

Используются два так называемых зкспресс-метода:

  • Экспресс-метод со стандартным универсальным реагентом в пробирке без подогрева.
  • Экспресс-метод на плоскости без подогрева.

а) Экспресс-метод определения Rh-фактора стандартным универсальным реагентом в пробирке без подогрева
Для исследования может быть использована свежая несвернувшаяся кровь, взятая из пальца (из вены) непосредственно перед исследованием, или консервированная кровь без предварительной обработки, а также эритроциты из пробирки после формирования сгустка и отстаивания сыворотки.
Методика проведения реакции
Исследование проводят в центрифужных пробирках объемом не менее 10 мл. На дно пробирки вносят одну каплю стандартного универсального реагента, представляющего собой антирезусную сыворотку группы

AB(IV), содержащую 33% раствор полиглюкина. Затем в нее добавляют одну каплю исследуемой крови (или эритроцитов). Круговым вращением пробирки содержимое размазывают по ее внутренней поверхности таким образом, чтобы содержимое растеклось по стенкам. Это значительно ускоряет агглютинацию и делает ее крупнолепестковой. Агглютинация на стенках пробирки наступает, как правило, в течение первой минуты, но для образования устойчивого комплекса «антиген — антитело» и четкой агглютинации наблюдать следует не менее 3 минут. Затем для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2-3 мл физиологического раствора и перемешивают путем однодвукратного перевертывания пробирки (без взбалтывания!).
Оценка результатов
Наличие агглютинации (крупные хлопья на фоне просветленной жидг кости) указывает на резус-положительную принадлежность исследуемой крови. Отсутствие агглютинации (в пробирке гомогенно окрашенная розовая жидкость) свидетельствует о резус-отрицательной принадлежности исследуемой крови.
б) Экспресс метод определения Rh-фактора на плоскости без подогрева
Методика проведения реакции
На белой пластинке со смачиваемой поверхностью пишут фамилию и инициалы лица, кровь которого исследуется. На левом краю пластинки делают надпись «сыворотка — антирезус», на правом —* «контрольная сыворотка». Последней служит разведенная альбумином сыворотка группы АВ (IV), не содержащая антител анти-резус. Соответственно надписям на пластинке помещают по 1-2 капли (0,05-0,1 мл) реактива антирезус и контрольной сыворотки. К обеим каплям добавляют исследуемые эритроциты. Кровь размешивают с реактивом сухой стеклянной палочкой, размазывая на пластинке до образования капли диаметром 1,5 см. Пластинку слегка покачивают. Через 3-4 минуты для снятия возможной неспецифической агглютинации к каждой капле добавляют 5-6 капель физиологического раствора. Затем пластинку покачивают в течение 5 минут.
Оценка результатов
Результат оценивают по наличию или отсутствию агглютинации невооруженным глазом.
Наличие хорошо выраженной агглютинации в капле слева указывает на резус-положительную принадлежность исследуемой крови. Отсутствие агглютинации в этой капле (гомогенная окраска) говорит о резус- отрицательной принадлежности исследуемой крови (Rh-). Результат считается истинным лишь при отсутствии признаков агглютинации в правой (контрольной) капле.

  1. ЛАБОРАТОРНЫЕ СПОСОБЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗУС-ФАКТОРА

Для определения резус-принадлежности крови больного в условиях лаборатории применяют четыре основных метода.
а) Метод агглютинации в солевой среде
Используют специальные сыворотки, содержащие полные антитела анти-резус. Эритроциты в виде 2% взвеси в изотоническом растворе хлорида натрия соединяют в пробирках с антирезусной сывороткой. Пробирки помещают на 1 час в термостат при температуре 37°С, после чего осадок эритроцитов на дне пробирки рассматривают с помощью лупы и по его форме учитывают результат. При положительном результате (Rh+) осадок имеет характерный рисунок в виде нитей или зернистости. При отрицательном (Rh-) осадок размещается равномерным слоем и имеет вид правильно очерченного круга.
б) Метод коиглютинации с желатином
В пробирку помещают равные объемы исследуемых эритроцитов, антирезусной сыворотки и 10% раствора желатина. Пробирки инкубируют при температуре 45-48°С, после чего добавляют десятикратный объем физиологического раствора. Пробирки 2-3 раза переворачивают и учитывают результат по наличию агглютинации, видимой невооруженным глазом.
в) Непрямой антиглобулиновый тест (реакция Кумбса)
Эта реакция является наиболее чувствительной для выявления неполных антител к ауто- и изоантигенам эритроцитов. К ней, как правило, прибегают при возникновении трудностей в определении резус-принадлежности крови, связанных с нечеткими результатами, полученными при других методах исследования. Реакция основана на использовании антиглобулиновой сыворотки (АГС).
При обработке резус-положительных эритроцитов неполными антителами анти-Rh наступает их обволакивание (сенсибилизация) по отношению к АГС, которая и агглютинирует сенсибилизированные эритроциты, поскольку имеет антитела к глобулинам.
В пробирку вносят антирезусную сыворотку и отмытые физиологическим раствором эритроциты; помещают на 1 час в термостат при температуре 37°С, после чего эритроциты тщательно отмывают. Последующий этап реакции проводят на плоскости. Каплю взвеси эритроцитов смешивают с равным количеством антиглобулиновой сыворотки и учитывают результат. Наличие агглютинации является показателем того, что исследуемый образец крови резус-положительный. Если агглютинация отсутствует, испытуемая кровь — резус-отрицательная.
г) Реакция с анти-В-моноклональнымн антителами
На планшете смешивают большую каплю (0,1 мл) анти-В-монокло- нальных антител (МКА) и маленькую каплю (0,01мл) исследуемой крови.

Читать еще:  Причины и лечение атеросклероза почечных артерий

За реакцией наблюдают в течение 2,5 мин. При смешивании анти-D-MKA с образцами резус-положительных эритроцитов отмечается быстро насту* пающая лепестковая агглютинация. Если кровь резус-отрицательная — агглютинация отсутствует.
ВОЗМОЖНЫЕ ОШИБКИ
*
Чаще всего ошибки являются следствием методических погрешностей при проведении исследования, в особенности при использовании конглютинационных методов. К ложным результатам может привести неправильное соотношение между сывороткой и эритроцитами, преждевременная оценка результатов, оценка результатов по высыхающей капле, определение резус-фактора в гемолизированном и длительно хранящемся образце крови, а также использование неактивных, инфицированных и загнивших сывороток, использование сывороток с истекшим сроком годности.
Причиной ошибок могут быть биологические особенности испытуемой крови: снижение агглютинабельности резус-антигена при некоторых заболеваниях печени, почек, системы крови, а также неспецифическая агглютинация испытуемых эритроцитов. В случае сомнительных результатов исследование повторяют, применяя более активные антирезусные сыворотки.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗУС-ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗУС-ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ С ПОМОЩЬЮ СТАНДАРТНЫХ СЫВОРОТОК

Понятие резус-фактор — слишком общее (и устаревшее). Система резус антигенов многообразна. Современные методы исследования позволяют делать тесты индивидуально по резусу D, С, с, Е, е. Кроме этого, необходимо выявлять случаи со слабым D-антигеном или вариабильным D-антигеном. Вся эта информация тоже крайне важна при подборе донора в случае необходимости.

Ход работы. Определение резус-принадлежности крови проводится с помощью стандартной универсальной сыворотки «антирезус» для всех групп крови. В пробирку вводят одну каплю (0,05 мл) исследуемой крови или эритроцитов и добавляют 1—2 капли стандартного универсального реагента «антирезус» той же группы крови. Перешивают содержимое путем встряхивания пробирки и помещают ее на водяную баню на 5 минут при температуре 370С, так как иммунная реакция с антигеном требует оптимальной температуры. Как правило, агглютинация наступает в течение 3-5 мин. По истечении этого времени для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2—3 мл изотонического раствора хлорида натрия и перемешивают (но взбалтывая!), 2—3 раза переворачивая пробирку.

В некоторых случаях не представляется возможным определение резус-принадлежности реципиента, тогда пользуются индивидуальной пробой на резус-совместимость крови донора и реципиента.

На чашку Петри наносят 2 капли сыворотки крови больного и маленькую каплю переливаемой крови, их смешивают и ставят на водяную баню (42-45 °С) на 10 мин. Если наступила агглютинация, то кровь донора несовместима с кровью реципиента и ее переливать нельзя.

Трактовка результатов. Пробирки просматривают на свет невооруженным глазом. При положительном резуль­тате агглютинация выражается в появлении хлопьев из склеенных эритроцитов на фоне просветленной жидкости. При отрицательном результате жидкость в пробирке остается равномерно окрашенной, без признаков агглю­тинации эритроцитов. Результат учитывают как истинный после проверки контрольных, образцов, т. е. при поло­жительном результате со стандартными резус-отрицательными эритроцитами, одногруппными с исследуемой кровью.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗУС ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ С ПОМОЩЬЮ ЦОЛИКЛОНОВ

Цоликлоны изготавливаются из асцитной жидкости мышей – носителей анти-D и анти-С гибридом. Цоликлоны Анти-D, Анти-С, Анти-с предназначены для определения резус принадлежности крови.

Ход определения. На планшет индивидуальными пипетками наносятся цоликлоны Анти-D, Анти-С, Анти-с по одной большой капле (0,1мл). Рядом с каплями антител наносится по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01 мл). Кровь смешивается с реагентом. Наблюдается ход реакции с цоликлонами визуально при легком покачивании планшета в течение трех минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3-5 сек., но наблюдение следует вести 3 минуты ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности резус-антигена. При использовании цоликлонов термостатировать не требуется,

Интерпретация результатов. Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.

Наличие агглютинации с Анти-D, Анти-С или Анти-с цоликлонами свидетельствует о том, что кровь резус-положительная, а отсутствие агглютинации – что кровь резус-отрицательная.

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector